常用濃度為0.05-0.5摩爾/升,作用時間為5-60分鐘。
小心,那東西劇毒致癌。
人工化學誘變技術:
化學誘變技術是指利用某些化學物質來提高生物的自然突變率。這些化學物質被稱為“化學誘變劑”。其特點是:可操作性強,簡單明了;特異性強,能使位於DNA上的壹些堿基發生突變;後代容易穩定遺傳,壹般在F3代就能穩定;遺傳標記的應用是細胞融合技術的基礎。
誘變劑主要有五類,它們的特點、作用機理和應用如下:
1,烷化劑:可將某些堿基烷基化,如甲基化鳥苷酸,影響mRNA的轉錄,從而使蛋白質表達紊亂,使蛋白質重組,改變其性狀。臨床應用這類物質作為抗癌藥,對癌細胞有很強的殺傷作用,所以應用於植物時,也要註意其強大的殺傷作用。
主要有:甲基磺酸乙酯(EMS),是最常用的誘變劑。我們用它作為真菌的遺傳標記,突變率很高。常用濃度為0.05-0.5摩爾/升,作用時間為5-60分鐘。這種物質有很強的致癌性和揮發性,5%的硫代硫酸鈉可作為終止劑和解毒劑。西格瑪公司價格:80元/25ml。
硫酸二乙酯(DMS)也是常用的,但由於其毒性較強,目前很少使用,作用機理和用法與EMS基本相同。屬於劇毒品,歸公安局管。
乙烯亞胺,產量少,很難買到。只要用於大量誘變育種,濃度為0.0001-0.1%,具有高度致癌性!使用時需要緩沖配置。
作為抗癌藥的鹽酸氮芥,可以從藥店買到,但有些地方必須有主任醫師的處方。
壹般是註射液,稍加稀釋即可使用5-10min,甘氨酸可作為終止劑和解毒劑。
環磷酰胺、亞硝基胍等物質也可作為誘變劑,但很少使用。
2.堿基類似物:分子結構與堿基相似,導致DNA復制錯配、mRNA轉錄紊亂、功能蛋白重組和表型改變。這些物質毒性相對較小,但負突變率較高,往往很難得到好的突變體。主要包括:6-溴尿嘧啶、6-BudR、馬來酰肼、2-氨基嘌呤等。,也是抗癌藥,稍微稀釋壹下就可以在藥店買到。
3.包埋劑:是分子生物學中常用的壹種,誘導率高。原理是這類分子的大小可以嵌入堿基分子中,導致錯配。最常用的:溴化乙錠(EB),高度致癌!價格貴,但是突變率很高。是實驗室常用的試劑,在實際生化店裏可以買到,價格1500元/100mg。
4.無機化合物:相對容易獲得,效果壹般,危險性較小。常用:氯化鋰,白色粉末,配成0.1-0.5%溶液30 min-2天。可以去化工商店買:120元/500克。
亞硝酸鹽:沒有現成的商品。因為這種物質容易分解,所以現在使用。亞硝酸鈉和鹽酸是常用的制劑。將亞硝酸鈉混合至濃度為0.01-0.1mol/L,使用時加入相同濃度和體積的鹽酸。
雙氧水:又名雙氧水,效果不好,所以很少用。
5其他:還原劑鹽酸羥胺作用於C,使G-C變成A-T,也是常用的,可以買到。使用濃度:0.1-0.5%,持續60分鐘-2小時。更便宜。
生物堿類:如長春堿、秋水仙堿、喜樹堿等。
上述誘變劑是致癌物,同時在使用時必須小心。通常用來浸種,最好的方法是在組織培養的培養基中添加誘變劑,誘變率最高。
對人體危害很大,有壹定的致癌作用。操作時要嚴格保護,不要讓藥物接觸皮膚。用過的工具也要嚴格收集隔離,防止出錯。
二、常見化學誘變劑的種類和作用機理
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(1)烷化劑
它是誘導栽培作物突變的最重要的誘變劑。該試劑具有壹個或多個活性烷基。烷基取代其他分子的氫原子稱為“烷基化”,所以這類物質稱為烷化劑。
烷化劑分為以下幾類:
1.烷基磺酸鹽和烷基硫酸鹽
代表性試劑:甲基磺酸乙酯(EMS)和硫酸二乙酯(DES)
2.硝基烷基化合物
代表試劑:亞硝基乙基脲(NEH)、N-亞硝基-N-乙基脲(NEU)。
3.乙二胺和環氧乙烷
代表代理人:乙烯亞胺(EI)
4.芥子氣
氮芥和硫芥
烷化劑-烷基化的機制集中在核酸上,導致DNA斷裂、缺失或修復
(II)基於核酸類似物
這些化合物具有與DNA堿基相似的結構。
代表代理人:
5-溴尿嘧啶(BU)和5-溴脫氧尿苷(BudR)是胸腺嘧啶(T)的類似物。
2-氨基嘌呤(AP)是腺嘌呤(A)的類似物。
馬來酰肼是尿嘧啶的異構體
作用機理:作為DNA的壹種成分,滲透到DNA分子中,在DNA復制過程中造成配對錯誤,從而引起生物體變異。
㈢其他誘變劑
亞硝酸鹽可使嘌呤或嘧啶脫氨,改變核酸的結構和性質,引起DNA復制障礙。HNO2 _ 2還能引起DNA雙鏈之間的交聯,引起遺傳效應。
疊氮化鈉(NaN3)為呼吸抑制劑,可引起基因突變,突變頻率高,無殘留毒性。