用途
該方法通常用於葉綠素色素的檢測、氨基酸的鑒定和測定、橘皮精油的檢測以及壹些特定的細胞篩選實驗。
原理
紙層析是根據極性相似溶解原理，以濾紙纖維的結合水為固定相，以有機溶劑為流動相。由於樣品中物質的分布系數不同，擴散速度也不同，從而達到分離的目的。色譜後的樣品可用比移值（Rf）表示各組分的位置（比移值=中心原點到中心色譜斑的距離與中心原點到流動相前沿的距離之比），由於影響比移值的因素較多，所以壹般采用在相同實驗條件下的相同對照物進行比較，以確定其異同。作為單體鑒定，供試品與對照品（標準品）的主要色譜斑點的顏色（或熒光），應與對照品（標準品）或供試品與對照品（1:1）混合物的主要色譜斑點的顏色相同。作為質量指標（純度）檢查，可取壹定量的試樣，展開後，根據規定的單體、雜質色譜斑點的數量或顏色（或熒光）的強度進行檢查。作為含量測定，可將色譜斑切斷洗脫，再用適當方法測定，也可用色譜掃描儀測定。
色譜系統
固定相壹般是吸附在紙纖維上的水，流動相是不溶於水的有機溶劑；也可以使紙吸收其他物質作為固定相，如緩沖液、甲酰胺等。
編輯應用
操作方法
將試樣點在紙條的壹端，然後在裝有適當溶劑的密閉槽中展開。當組分移動壹定距離後，每個組分移動不同的距離，最後形成相互分離的斑點。取下紙條，待溶劑揮發後，用顯色劑或其他合適的方法確定斑點位置。根據組分移動距離（Rf 值）與已知樣品比較，進行表征。使用光斑掃描儀或移除成分光斑，用溶劑溶解成分，用合適的方法（如光度法、比色法等）定量。
應用和實例
在環境分析測試中，有時用紙色譜法分離樣品成分，它被用於壹些精度較低的分析，如 3,4-苯並芘。不過，它不像氣相色譜和高效液相色譜那樣常用。葉綠體色素分離所用的方法是，將葉片粉碎，浸出綠色液體，將該液體與色譜液（石油醚）混合，將濾紙的壹段放入混合液體中，4 種色素在色譜液中的溶解度不同，在濾紙上留下 4 條色素帶。通過觀察，可以檢查出各種色素的相對含量和種類。紙層析壹般用於葉綠體中色素的分離，葉綠體中的色素主要包括類胡蘿蔔素、葉黃素、
[1]葉綠素a、葉綠素b，它們在層析液中的溶解度不同，溶解度大的隨著層析液在濾紙上的擴散快，反之則慢；含量多的色素帶也較寬。最後，濾紙上留下了 4 條色素帶，因此葉綠體中的色素可以通過紙層析清楚地分離出來。
註意事項
紙層析所用的有機溶劑（如丙酮）壹般都具有揮發性和毒性，因此在層析時壹定要密封，以免吸入過多的有害揮發物。
編輯實驗
儀器藥品
大試管 天平 底幔（紙板上有孔，防止丙酮揮發） 量筒 燒杯 漏鬥 軟木塞 濾紙 丙酮（可用無水乙醇代替） 四氯化碳 無水硫酸鈉 碳酸鈣 石英砂
操作步驟
1．稱取鮮葉2g，放入缽中加丙酮5ml、碳酸鈣少許（防止破壞葉綠素）和石英砂（幫助研磨），研磨成均質液後，再加丙酮5ml，然後用漏鬥過濾，即得色素提取液。2.取準備好的濾紙條（2×20cm），剪去兩邊的壹端，中間留壹條長約1.5cm、寬約0.5cm的窄條，在濾紙剪口上方折壹條直線作為基線，畫出壹條濾液細線。3.用毛細吸管蘸少許濾液在折線上描繪 4～5 次，註意畫勻、畫直、畫細，每次畫完壹條細線要等其自然幹燥後再畫第二條線。4.在壹個大試管中，加入四氯化碳 3 Gleditsia 5 毫升和少許無水硫酸鈉（即色譜溶液）。然後將濾紙條固定在軟木塞上，插入試管中，使窄端浸入溶劑中（著色點應略高於液面，濾紙條邊緣不應接觸試管壁），蓋緊軟木塞，直立於暗處進行層析。0.5-1 小時後，觀察分離出的色素帶的分布。最上面的橙黃色是胡蘿蔔素，接下來的黃色是葉黃素，接下來的藍綠色是葉綠素 a，最後的黃綠色是葉綠素 b。[1]
普通高中相關實驗
從植物葉綠體中提取和分離色素 用具和器皿：壹把剪刀、壹張幹燥的定性濾紙、50 毫升燒杯和 100 毫升燒杯各 3 個、白紙 3 張、試管架 3 個、研缽、玻璃漏鬥、尼龍布或紗布、毛細管、藥匙、10 毫升量筒、天平、3 支試管、壹塊硬紙板、3 個棉塞、3 個培養皿、刻度尺、註射器、蓋玻片 試劑：丙酮、無水乙醇、乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯：丙酮、無水乙醇、層析吸附劑（20 份石油醚、2 份丙酮、1 份苯）、二氧化矽、碳酸鈣、碳酸鈉。材料：新鮮菠菜葉、大白菜葉、黃楊木葉 背景：1、葉綠素等脂溶性有機分子，根據相似溶解原理，葉綠素等色素分子易溶於有機溶劑而不溶於有極性的水。因此，在研磨和收集葉綠素時應采用丙酮或乙醇等不含水分的有機溶劑。2、葉綠素分布在基質薄片膜上，加入少許二氧化矽是為了研磨細胞壁、質膜、葉綠體外質和光合薄片，使色素溶於丙酮中。3、破碎的細胞中含有草酸等有機酸，葉綠素分子中含有的鎂元素處於不穩定狀態，鎂離子和有機酸會導致色素分子破壞。加入少許碳酸鈣，使鈣離子與有機酸結合，減少鎂離子的轉移，防止研磨時破壞葉綠素色素。因此在研磨時要加入適量的碳酸鈣，加入碳酸鈉也是同樣的道理。4、在過濾時要用脫脂棉或紗布，而不要用濾紙。主要原因如下：(1）色素分子比較大，不易透過濾紙；（2）濾紙有很強的吸附性，色素吸附在濾紙上，從而降低了色素的濃度，影響實驗結果；（3）葉綠素是脂溶性的，根據相似相容的原理，脫脂棉可以減少色素在實驗過程中的損失，增強實驗效果。5、根據物理學中的毛細現象，在繪制濾紙細線前必須將濾紙烘幹，是為了阻止水分子堵塞濾紙中的毛細管，影響色譜溶液的擴散。但如果用火烘烤，會使濾紙纖維變形的同時破壞拉毛細管，影響色譜溶液的擴散。6、由於不同位置的液面表面張力不同，紙條靠近液面時，邊緣的表面張力較大，色譜液沿濾紙邊緣擴散過快，造成色素帶分離不整齊現象。因此，應剪掉濾紙條壹端的兩個角插入色譜液中。7、為了防止濾紙條掉入色譜液中而使色譜實驗失敗。同時，防止液體表面張力造成色譜液沿濾紙條向上的 "壁流 "而導致顏料溶解。8、色素的分離原理：紙層析是壹種以濾紙為載體的色層分析方法，其原理主要是利用混合物中各組分在；流動相和固定相中的分布比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定相（濾紙纖維常吸附 20% 左右的水），乙醇等有機溶劑為流動相，顏料提取物為色譜試樣。試樣點在濾紙濾液線的位置，當流動相溶劑在濾紙毛細管的作用下，連續沿濾紙向前通過濾液線時，試樣中的組分就會隨著流動相溶劑向前移動，並在流動相和固定相溶劑之間連續出現壹次分配。因此，分布比大的物質移動速度快，移動距離遠；分布比小的物質移動速度慢，移動距離近，樣品中的組分分別聚集在濾紙的不同位置，從而達到分離的目的。