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用什麽實驗方法確定土壤微生物各成分的含量

為了研究土壤中細菌、真菌和放線菌的數量,我們利用選擇培養基在土壤水溶液中篩選出目標菌株,然後用分數濃度梯度法在選擇培養基上培養菌落進行計數。計數時可以根據不同菌株的不同形態特征進行區分,如果有上述三種特征以外的菌株,還可以通過革蘭氏染色法進行鑒定。

I.主要實驗藥品和儀器

(1)實驗藥品:牛肉膏、蛋白腖、NaCl、瓊脂;1mol/L NaOH、1mol/L HCl、可溶性澱粉、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、葡萄糖

(2)實驗儀器:試管。三角燒瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、分液器、扭力天平、牛角尖、高壓鍋、pH 試紙(pH 5.5-9.0)、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布等。

二、實驗方法

1、細菌分離:取1g土樣,加入99ml無菌水,振蕩10min,制成10-2土壤稀釋液,再取0.5ml 10-2土壤稀釋液加入4.5ml無菌水中,制成10-3土壤稀釋液,依此類推-----。取 0.1 毫升 10-5 、10-6 、10-7 土壤稀釋液加入相應編號的培養基中,塗布平板,每個稀釋液塗布兩個平板。在 30 度恒溫培養箱中培養 24h 後觀察結果。

2、放線菌分離:取土壤樣品 1g,加無菌水 99ml,振蕩 5min,制成 10-2 土壤稀釋液,再取 0.5ml 10-2 土壤稀釋液加無菌水 4.5ml,制成 10-3 土壤稀釋液,以此類推 -----。取 0.1 毫升 10-3 、10-4 、10-5 土壤稀釋液加入相應編號的培養基中,塗布平板,每種稀釋液塗布兩個平板。在 28 度恒溫培養箱中培養 5~7d 後觀察結果。

3、黴菌分離:取 5g 土樣,加入 95ml 無菌水,震蕩 5min,制成 10-2 土樣稀釋液,再取 0.5ml 10-2 土樣稀釋液加入 4.5ml 無菌水,制成 10-3 土樣稀釋液,依次類推 -----。融化滅菌培養基,加入鏈黴素溶液,待培養基凝固後,取 0.1ml 10-2 、10-3 、10-4 土壤稀釋液加入相應編號的培養基中,塗布平板,每個稀釋度塗兩張平板。在 28 度恒溫培養箱中培養 3~5d 後觀察結果。

三、結果與討論 培養結束後,觀察培養基上的菌落,由於經濟、效果、作用等多方面的原因,培養基不能完全分離出土壤中的各種細菌,例如土壤中除了細菌、黴菌、放線菌外,還有大量的雜菌,如:酵母菌、真菌、藻類等、微生物,如:各種寄生蟲(卵)等,所以我們要以細菌、放線菌等為主。所以我們要根據細菌、放線菌和黴菌的宏觀物理性質將它們分開。在進行顯微鏡觀察時,黴菌不需要染色,放線菌和細菌應先簡單染色,然後在顯微鏡下觀察生物的形態。

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