1.1吸附法
吸附是通過物理吸附將酶固定在載體如纖維素和瓊脂糖或多孔玻璃和離子交換樹脂上的方法。
顯著的特點是:
工藝簡單,條件溫和,包括無機和有機高分子材料、
吸附過程可以同時實現純化和固定化;
酶可以在失活後重新激活,
載體也可以再生。
但是要求載體具有大的比表面積和活性表面。
1.2嵌入方法
包埋固定化法是將酶固定在多孔載體如高分子材料的晶格結構或微膠囊結構中,而底物仍能滲透到晶格或微膠囊中與酶接觸。這種方法比較簡單,酶分子只是包埋,生物活性破壞程度低,但這種方法不適合大分子底物。
(1)網格類型
將酶包埋在凝膠的細網格中制成壹定形狀的固定化酶,稱為網格包埋法。也稱為凝膠包埋法。
(2)微膠囊型
固定化酶是將酶包埋在高分子聚合物制成的小球中制成的。因為形成的酶珠直徑壹般只有幾微米到幾百微米,所以也叫微囊化。
1.3組合方法
通過酶蛋白分子與不溶性固體載體表面的離子鍵結合來固定酶的方法稱為離子鍵結合法。同時,形成化學鍵結合的固定方法稱為價鍵結合法。* * *價鍵結合法結合力強,使用過程中酶不易脫落,穩定性好。
這種方法的缺點是載體的活化或固定化過程復雜,反應條件強烈,往往需要嚴格控制條件才能獲得高活性的固定化酶。
1.4交聯法
交聯法是將酶蛋白與多功能試劑交聯,使酶分子與多功能試劑之間形成價鍵,得到三維交聯網絡結構。除了酶分子之間的交聯,還有壹些分子內交聯。多功能試劑制備固定化酶方法可分為:
(1)單獨與酶作用;
(2)將酶吸附在載體表面,然後進行交聯;
(3)多功能試劑與載體反應,得到帶有功能基團的載體,然後連接酶。交聯劑的種類很多,最常用的是戊二醛,其他還有異氰酸酯衍生物、雙偶氮聯苯胺、N,N-乙烯馬來酰亞胺等。
交聯法的優點是酶與載體結合牢固,穩定性高;缺點是有些方法固定化操作復雜,進行化學修飾時容易造成酶失活。
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競爭性抑制劑通常與被抑制酶的底物有結構上的相似性,能與底物競爭酶分子上的結合位點,從而產生酶活性的可逆抑制。與酶的活性中心結合。與酶的結合是可逆的。
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增加底物濃度可以削弱競爭性抑制劑的影響。