薄層色譜法是在洗凈的玻璃板（10×3cm左右）上均勻地鋪壹層吸附劑或支持劑，待幹燥後，將活化的樣品溶液用扁平毛細管滴於距薄層板起始線端約1cm處，幹燥或吹幹後將薄層板中的展開劑放入展開槽中，浸入深度為0。5cm，待展開劑前緣距板頂約 1cm 附近時將其取出，晾幹後噴上著色劑，或在紫外線燈下顯色。當展開劑前緣距頂部約 1cm 時，將色譜板取出，幹燥後噴上著色劑，或在紫外燈下顯色。 基本介紹 中文名稱：薄層色譜法 外文名稱：（Thin Layer Chromatography） 別名：薄板色譜法 分類屬性： 快速分離少量物質的實驗技術 原理、實驗步驟、註意事項、發展趨勢、橡膠板、原理
基本原理 色譜法的基本原理是利用物質對混合物中各組分的吸附作用。色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某種物質中不同的吸附或溶解性質，或與其他物質親和作用性質的差異，使混合物的溶液流經該物質，進行反復的吸附或分布等作用，從而將各組分分離。薄層色譜是壹種微量、快速、簡單的色譜方法。由於各種化合物的極性不同，吸附能力也不相同，移動展開劑時對其解析度不同，根據原點到主斑中心和展開劑沿邊緣的距離，計算比移值（Rf）：化合物的吸附能力與其極性成正比，極性越大的化合物吸附力越強，因而 Rf 值越小。在給定的條件下（吸附劑、展開劑、板厚等），化合物移動的距離與展開劑移動的距離之比壹定，即 Rf 值是化合物的物理常數，其大小只與化合物本身的結構有關，因此可以根據 Rf 值來識別化合物。薄層色譜法可用於分離少量樣品（幾微克到幾十微克，甚至 0.01 微克）：也可用於分離多達 500 毫克的樣品，是現代有機化學表征和定量的重要手段。它尤其適用於那些揮發性小的化合物和在高溫下易發生化學變化而無法用氣相色譜進行分析的物質。 實驗步驟 展開平板 定點擴增 顯色 計算 Rf 值 展開平板 取 5 張約 7.5x2.5cm 的載玻片，洗凈並擦幹。在 50mL 燒杯中，放入 3g 矽膠 G，逐漸加入 0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液（CMC）8mL，調成均勻的糊狀，塗在上述幹凈的載玻片上，用手將塗有糊狀物的載玻片在水平桌面上做上下稍顛倒，做成薄、厚、均勻、表面光滑的薄層板，將塗有矽膠 G 的薄層板放置在水平玻璃板上，室溫下放置 0.在水平玻璃板上室溫放置 0.5h，然後放入烘箱中，緩慢升溫至 110℃，恒溫 0.5h 後取出，稍涼後置於幹燥器中備用。點樣毛細管用內徑為<lmm的平口毛細管，將樣品溶於沸點較低的溶劑（乙醚、丙酮、乙醇、四氫呋喃等）中形成溶液。點樣前，可先用鉛筆在小木板上從壹端 5mm 處輕輕畫壹條水平線，作為起點線，然後用毛細管吸取樣品在起點線上仔細點樣，如需重復點樣，則應待前次點樣的溶劑揮發後再集中進行。如果在同壹平板上有多個樣品，樣品點之間的距離要大於 5mm。解折劑的選擇主要根據樣品的極性、溶解性和吸附劑活性等因素綜合考慮。薄層的展開在密閉容器中進行。先選用展開劑放入廣口瓶中，使廣口瓶內空氣飽和 5-10min 後，再將點好的試樣薄片放入廣口瓶中展開，試樣位置必須在展開劑液面以上，當展開劑上升到薄層邊緣時（距前端 5~10mm）或多組分已明顯分離時，取出薄層薄片平整晾幹，用鉛筆劃壹下！溶劑前端位置後，即可顯色。如果化合物本身有顏色，可以直接觀察其斑點。如果是無色的，可以先在紫外光下觀察有無熒光斑點（苯環物質有），用鉛筆在薄層板上劃出斑點的位置；對於紫外光下不顯色的，可將其放在盛有少量碘蒸氣的容器中顯色，以檢查色斑（因為許多化合物都能和碘反應而變成黃褐色的斑點），顯色後，再立即用鉛筆劃出色斑的位置。計算 Rf 值 準確找出樣品展開後的原點、溶劑前沿和斑點中心，分別測量溶劑前沿和斑點在薄層板上移動的距離，求出其 Rf 值。 註意事項 1、因為是幹板，鋪板時手要平滑，否則容易不平整。2、點樣時幾個點應在壹條直線上，大小要適當（點直徑壹般不超過 2mm），間距為 5~6mm。3、點樣時毛細管不能交叉使用。4、由於溶液太稀，壹個進樣點如果不夠重復進樣點，則應等前壹個進樣點溶劑揮發後再聚焦，以防止進樣點過大，造成拖尾、擴散等現象，影響分離效果。5、端樣點待幹燥後，方可展開。點樣要輕，不要刺破薄層。6、放板時手要平穩，否則會出斜線。制備薄層板所需的儀器和試劑 燒杯（50mL）、載玻片、玻璃棒、1%羧甲基纖維素鈉（CMC）水溶液、矽膠 G、去離子水 註意事項：1）室溫尤其不能太潮濕 2）矽膠和水的比例要合適：2.5-4.5 最好。可根據自己點樣的粘度調整 3）研磨時，要均勻、耐心，不要怕費時間 4）活化時，要註意活化過程中不應受到幹擾 5）研磨要細，混合要均勻，鋪板時要避免氣泡，厚度要均勻。 發展趨勢 現代薄層色譜基本上被各種儀器所取代，消除了實驗過程中的諸多影響因素。這也是國內科技發展的壹大趨勢，逐步取代實驗過程中人為因素的影響，從而達到重現性的效果。在設置方面也是多種多樣，在制藥、食品、保健品、化妝品、法醫、飼料、工業等方面都有較為廣泛的設置。 粘合板 手動鋪設色譜板需要很長時間，因此為了方便起見，可以直接從市場上購買標準色譜板。商品色譜板壹般標有 G、H、GF、HF；其中 G 表示凝固劑，H 不含凝固劑，G 的價格壹般低於 H；F 表示熒光 國內商品色譜板的質量與國外相比還有很大差距，不建議使用國產商品色譜板（矽膠粒徑大，均勻度不夠高）。矽膠 G：含 13%-15%煆燒石膏 矽膠 H：純矽膠 矽膠 GF：254 熒光劑和粘結劑 粘結劑 CMC：羧甲基纖維素鈉
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