1.掌握DNA的粗提取和鑒定方法。
2.觀察提取的DNA物質。
二,教學建議
在本實驗的教學中,教師應註意以下幾點。
1.實驗材料壹定要準備好。本實驗所用的實驗材料是雞血細胞液,是由活雞血沈澱得到的。每組(2名學生)需要5 mL的雞血細胞,那麽每節課(50人)至少需要130 mL,而雞血細胞與雞血的體積比為1:3,那麽每節課至少需要390 mL的雞血細胞。殺1中型活雞壹般能得到120 mL左右的血,所以1班需要買4只活雞。如果沒有條件買活雞,也可以到賣活雞的市場要雞血,但壹定要提前在燒杯裏放抗凝血劑。
2.用於雞血細胞液體的容器,優選塑料容器。雞血細胞破碎後釋放的DNA很容易被玻璃容器吸附。因為細胞中DNA的含量已經比較少了,如果用玻璃容器吸附壹部分,提取的DNA就更少了。所以實驗時最好使用塑料燒杯和試管,這樣可以減少DNA在提取過程中的損失。
3.獲得更純DNA的關鍵步驟。
(1)充分攪拌的雞血細胞液DNA存在於雞血細胞的細胞核中。雞血細胞溶液與蒸餾水混合後,必須用玻璃棒朝壹個方向快速攪拌,以加速雞血細胞的破裂,釋放DNA。
(DNA沈澱必須用冷酒精。實驗前,必須準備大量95%的酒精,並在冰箱中保存(至少5秒鐘)至少24小時。
(3)適當攪拌含有懸浮物的溶液。實驗步驟3、5、7都需要用玻璃棒攪拌。老師要提醒學生,在第3步和第5步中,玻璃棒不要直接插入燒杯底部,攪拌要輕柔,以便獲得更完整的DNA分子。在步驟7中,將玻璃棒插入燒杯中溶液的中間,用手緩慢旋轉510分鐘。
3.參考資料
實驗原理補充介紹
1的釋放DNA。DNA位於雞血細胞的細胞核內,正常情況下不會釋放。為了從細胞核中釋放DNA,將蒸餾水加入到雞血細胞液體中並攪拌。蒸餾水對雞血細胞來說是壹種低滲液體,大量的水會進入血細胞,導致血細胞破裂。同時再加上攪拌的機械作用,加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂),從而釋放出DNA,當然還有RNA。然而,大量釋放的DNA和RNA往往與蛋白質結合。
2.DNA和蛋白質的分離是基於它們的特性,即在高濃度的氯化鈉溶液中(物質的摩爾濃度為2 moL/L),核蛋白容易解聚解離DNA。而d Na在高濃度氯化鈉溶液中的溶解度很高,Na+與帶負電荷的DNA結合形成DNA鈉鹽。此時,DNA溶解在溶液中。
3.DNA的分離與獲取基於DNA在低濃度氯化鈉溶液中溶解度低的原理,在含有DNA的高濃度氯化鈉溶液中加入大量蒸餾水(300 mL),稀釋氯化鈉溶液,使DNA的溶解度降低,而蛋白質的溶解度增加(這是鹽溶於蛋白質的現象),從而將兩者分離。此時,在不斷的攪拌下,溶解度下降的DNA逐漸變得絲滑。過濾後可以去除蛋白質,得到DNA的粘性物質。如果離心法則更好,以4 000 r/min的轉速離心65±438±0.5min,去除上清液(含蛋白質),留下含DNA的沈澱。
4.重新溶解DNA,然後用更高濃度的氯化鈉溶液溶解DNA粘性物質。
5.5的沈澱和濃度。DNA去除了蛋白質的核酸溶液,所以必須進壹步沈澱濃縮。最常用的方法是醇沈法。也就是說,將含有Na+的DNA溶液加入到兩倍於其體積的95%冷酒精溶液中。混合後,DNA可以沈澱並濃縮,形成雜質較少的DNA絲,懸浮在溶液中。如果細絲很少,可以將這種混合物放入冰箱冷卻幾分鐘。慢慢轉動玻璃棒(因為玻璃棒有吸附DNA的功能),可以把濃縮的DNA絲卷起來。
6.DNA的鑒定本實驗的DNA鑒定方法為二苯胺法(配方見下文“藥物制備”)。二苯胺法的原理是DNA中嘌呤核苷酸上的脫氧核糖與酸反應生成ω-羥基-γ酮戊醛,與二苯胺反應呈現藍色(溶液為淺藍色)。
鑒定時溶液的藍色與溶液中的DNA含量有關。
二苯胺試劑的制備
溶液A:將15 g二苯胺溶解在100 mL冰醋酸中,然後加入15 mL濃硫酸,儲存在棕色瓶中。如果冰醋酸是結晶狀態,使用前需要加熱融化。