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怎樣利用印三酮對氨基酸定量

1 茚三酮配制:稱0.6g茚三酮,加入15毫升正丙醇,溶解。再加入30毫升正丁醇,60毫升乙二醇,最後加入PH5。4的乙醇-乙酸鈉緩沖液9毫升,混勻,4攝氏度棕色試劑瓶保存,可保存十天。

2 PH5。4的乙醇-乙酸鈉緩沖液:54。4克乙酸鈉加入100毫升無氨蒸餾水,加熱至沸騰,使體積蒸發至60毫升左右。冷卻,加入30毫升冰醋酸,用無氨蒸餾水定容至100毫升。

3 氨基酸標液:稱80攝氏度烘幹的亮氨酸46。8毫克,用10%異丙醇定容至100毫升,為1毫摩爾/升的標準氨基酸儲備液,冰箱保存。從中取5毫升,蒸餾水定容至50毫升,為5微克/毫升氨基酸標準液。

4 氰化鈉儲備液:稱取490毫克,溶於壹升無氨蒸餾水,為0。01摩爾/升。

5 10%乙酸

6乙酸-氰酸鹽緩沖液:0。01摩爾/升氰化鈉20毫升,用乙醇-乙酸鈉緩沖液定容至壹升。

7標線

管號 1 2 3 4 5 6

氨基液標液(毫升)0 0。2 0。4 0。6 0。8 1

無氨蒸餾水(毫升)2 1。8 1。6 1。4 1。2 1

茚三酮(毫升) 3 3 3 3 3 3

乙酸-氰酸鹽緩沖液 0。5 0。5 0。5 0。5 0。5 0。5

每管遊離氨基酸含量(微克)

0 1 2 3 4 5

加完試劑後,沸水中加熱15分鐘,取後後迅速冷卻,並不時搖動,呈現藍紫色時,用60%乙醇定容至20毫升。搖勻,570納米測定吸光度。

計算:

含量(微克/100克)=C*VT*100/(VS*W)

C:從標線上查得的含量 微克

VT:樣品總體積 毫升

VS:測定時取用的樣品體積 毫升

W:樣品鮮重 克

得到標準曲線再將待測氨基酸溶液進行上述反應,根據吸光度值計算氨基酸含量

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