壹.實驗目的
1、掌握蒽酮法測定可溶性糖含量的原理和方法。
2、掌握植物可溶性糖的提取方法。
二、實驗原理
糖在濃硫酸的作用下,可脫水生成糠醛或羥甲基糠醛,生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色的糠醛衍生物,在壹定範圍內,其顏色的深淺與糖的含量成正比,因此可用於糖的定量測定。糖與蒽酮反應生成的有色物質在可見光區的吸收峰為 620 nm。
三、實驗材料
任何植物鮮樣或幹樣。
四、藥品和試劑
1、80%乙醇。
2、葡萄糖標準溶液(100μg/ml):準確稱取 100mg 分析純無水葡萄糖,用蒸餾水溶解並定容至 100ml,使用時稀釋 10 倍(100μg/ml)。
3、蒽酮試劑:稱取洋蔥酮 1g,溶於 80%濃硫酸(將 98%濃硫酸稀釋後,將濃硫酸緩慢加入蒸餾水中)1000mI,冷卻至室溫,貯於具塞棕色瓶中,冰箱貯存,可使用 2~3 周。
V.實驗儀器
分光光度計、分析天平、離心機、離心機、恒溫水浴鍋、試管、三角燒瓶、移液管、剪顫瓷片、玻璃棒、水浴鍋、電爐、漏鬥、濾紙。
六、實驗方法
1、可溶性糖樣品的提取:稱取剪碎混勻的新鮮樣品零點五至壹克,放入大試管中,加蒸餾水15毫升,在沸水浴中煮20分鐘,取出冷卻後,過濾到100毫升容量瓶中,用蒸餾水沖洗殘渣數次,並固定到刻度上。
2、標準曲線的制作:取6支大試管,編號從0到5,分別按表1-3加入試劑。
註意事項
1、蒽酮試劑中含有濃硫酸,使用時應註意。
2、蒽酮均應從同壹瓶中提取,以確保條件的壹致性。