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核苷類的藥物分析

方法名稱: 四維靈芝液—核苷類成分的測定—高效毛細管電泳法

應用範圍: 本方法采用高效毛細管電泳法測定四維靈芝液中的核苷類成分腺苷及鳥苷的含量。

本方法適用於四維靈芝液。

方法原理: 取供試品,離心取上清液,加於於處理好的大孔吸附樹脂上,依次以水、30%乙醇洗脫,收集30%乙醇部分,水浴上蒸幹,殘渣以水溶解定容,搖勻,過0.45μm微孔濾膜,濾液作為供試品溶液,註入高效毛細管電泳儀進行電泳分離,用紫外檢測器檢測腺苷及鳥苷的相應值,計算其含量。

試劑: 1.乙醇

2 .硼砂

3. 十二烷基磺酸鈉(SDS)

儀器設備: 1 儀器

1.1 高效毛細管電泳儀

1.2 熔融石英毛細管柱(75μm×57cm,有效柱長50cm)

1.3紫外檢測器

2 分離條件

2.1 運行緩沖液:20nmol/L硼砂(含30mmol/LSDS,pH 10.0) 95%乙醇 = 95 5

2.2 氣動進樣:20psi, 15s

2.3 柱溫:20℃

2.4 檢測波長:254nm

試樣制備: 1.稱取供試品

精密量取四維靈芝液20mL。

2. 對照品儲備溶液的制備

精密稱取腺苷及鳥苷適量,用水為溶劑配制成濃度為0.1mg/L的對照品儲備溶液。

3. 內標溶液的制備

精密稱取內標磺胺甲惡唑適量,用水為溶劑配制成濃度為0.2mg/L的內標溶液

4. 標準溶液的制備

精密吸取對照品儲備溶液各0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、2.0mL,置於5mL量瓶中,各加入內標1mL,加水至刻度,搖勻,得系列濃度的標準溶液。

5.供試品溶液的制備

取供試品,離心取上清液,加於於處理好的大孔吸附樹脂小柱(1.5×11cm)上,依次以水50mL、30%乙醇100mL洗脫,收集30%乙醇部分,水浴上蒸幹,殘渣以水溶解定量轉移至5mL量瓶中,加內標液1mL,加水至刻度,搖勻,過0.45μm微孔濾膜,濾液作為供試品溶液,

註:“精密稱取”系指稱取重量應準確至所取重量的千分之壹。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟: 1. 標準曲線的繪制

上述系列濃度標準溶液分別註入高效毛細管電泳儀進行電泳分離,以紫外檢測器檢測,檢測波長為254nm,將腺苷及鳥苷的濃度對其峰面積與內標峰面積比繪制標準曲線,進行線性回歸,得到回歸方程。

2. 供試品的測定

上述供試品溶液註入高效毛細管電泳儀進行電泳分離,以紫外檢測器檢測,檢測波長為254nm,記錄腺苷及鳥苷的相應值,計算其含量。

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