（二）急性毒性試驗（壹般安全試驗）取體重18－22g的健康不白鼠5只，由尾靜脈（或腹腔）註射壹定劑量的藥液（容量以0.5ml為宜，可用註射生理水稀釋成不同濃度），註射時間為4－5秒，觀察有無不良反應（如驚厥、四肢癱瘓、步伐不穩、豎毛、呼吸抑制等）或死亡。主要以死亡為指標，註射後48小時內不得有死亡。如有死亡應加取小白鼠10只重新試驗，全部小白鼠在48小時內不得有死亡（做過本試驗的小白鼠不得重復使用）。
註①供試品靜脈有困難時，可由腹腔註射，註射量仍為0.5ml，註射時間不限，註射後72小時內不得有死亡。
②若某壹藥物無安全試驗劑量時，可將臨床人用劑量乘以壹定的安全系數然後再折算成小白鼠體重的劑量。安全系數大小，應根據該藥物的純度及臨床試驗情況而定，壹般治療性藥物可定為50－100，需長期服用的藥物可為100以上。
例：某註射液，成人（按體重50kg計），每次註射量為4ml，安全系數為50，則小白鼠（按20g計）的給藥劑量為：
小鼠劑量＝4×50／50000×20＝0.08ml
取該藥0.08ml加0.9％氯化註射液稀釋成0.5ml，作為供試品的註射用量。
③也可用同樣方法試驗（即某壹劑量註入小白鼠內，若5只中只有1只死亡，則減劑量再試直至試出5只小白鼠均不死亡的劑量）。求出某藥物的安全系數。
計算公式：
安全系數＝小白鼠耐受量×成人體重（g）／成人用量×小白鼠體重（g）。
例：某藥特的劑量為4ml，當劑量為0.2ml（稀釋至0.5ml），給小白鼠靜脈註埋時引起死亡，減劑量再試，在0.16ml/20g時，沒有反應，故含有苯甲醇的註射劑，對試驗往產生幹擾，應引起註意。
④苯甲醇對小白鼠有壹定毒性反應，故含有苯甲的註射劑，對試驗結果往往產生幹擾，應引起註意。
（三）亞急性和慢性試驗需要較長期投用的藥物，應做亞急性或慢性毒笥試驗。方法和急性毒性試驗基本相同，按小白鼠體重計算，每在在口服或腹腔註射劑量為人用劑量的20－50倍，連續用藥1－8周。慢性毒性，連續用3－6個月。在用藥期間，應仔細觀察試驗動物的體重、進食量、進水量的變化，以及有無不良反應或死亡。動物在試驗前後，均應做血象、肝、腎等功能檢查，以資對照。試驗中死亡或試驗完畢的動物都要做解剖，觀察內臟器管和組織切片檢查。根據試驗結果，判斷可否用於臨床。
註①亞急性，慢性毒性試驗，均應設對照。這是由於的飼養環境和健康情況的不同個體差異往往很大，給藥後內臟的變化如無空白對照組做比較，常使實驗結果難以判斷。
②非經口服的藥品，應註意須滅菌後作用，以免動物被染而影響結果。
③毒性實驗的給藥途徑，應盡量采用與臨床應用的相同方法。給藥途徑不同毒性表現常是差別很大，如口服給藥的LD50比靜脈或腹腔註射的LD50大幾十倍。
④毒性實驗前，實驗設計要考慮周密，應盡力避免實驗中臨時改變條件。實驗用的動物，壹般應在本實驗室條件下2周以上，使動物適應環境後，再進行實驗。
⑤實驗室要註意加強對動物的管理，保持清潔衛生。對實驗中途死亡的動物應做出客觀的分析，以便正確總結判斷。
⑥毒性實驗中，除記錄計量指標外，支動物的壹般狀態如興奮、抑制、麻痹、呼吸、食欲、體重等應進行仔細地觀察、對實驗中藥物出現作用的時間，速度以及毒副作用的特點等，均應嚴密觀察，並詳細記錄，以便進行綜合分析。
⑦在亞急性、慢性毒性實驗中，應根據藥物的性質和實驗要求的不同，在給藥前後以及實驗時，對實驗動物易發生毒性反應的主要器官進行檢查。檢查項目有：
A血象：包括血色紅素、紅、白細胞及分類計數等。
B肝功能：肝臟是機體重要的代謝器官，不僅對糖、蛋白質及脂類代謝起得要作用，也是許多藥物在體內的解毒場所，故應進行肝臟功能的檢查。
C腎功能：大部分藥物從腎臟排泄，故應測定藥物對腎功能有無損害及其損害的程度，其中包括血中非蛋白氮含量，小便常規檢查。
D組織切片：可進壹步了解藥物對各臟器有無損害及其損害的程度。可將動物在不同的期內分批處死、取其心，肝、脾、肺腎、胃、腸等進行切片檢查，並與對照比較，觀察藥物對各組織有無可逆或不可逆損害。