裸鼠的飼養繁殖要求嚴格,國內也有過這方面經驗的報道。國外經過壹段時間的探索,在1969年,裏加德(Rygaard)和Ffiis報道了裸鼠的級別定義為SPF。飼養條件是無特定病原體或隔離系統,但傳染病也會發生。近十年來,許多國家都建立了自己的無特定病原體封閉飼養設施和相應的質量控制方法,進壹步推動了裸鼠研究的快速發展。1978據英國LAc News報道,除了將“nu”基因導入近交系小鼠,成功培育出數千只遺傳背景清晰的裸鼠,以及無胸腺肥胖裸鼠、無胸腺裸鼠和裸鼠。預計在不久的將來,根據不同的實驗需要,將會培育出更多的無胸腺雜交菌株。目前已經成立了國際專門組織“裸鼠管理與應用國際委員會”,分別在1973、1976+0979召開了三次裸鼠會議。過去我國的實驗動物工作者也曾在小鼠的大量繁殖中發現過無毛小鼠,但並未對其進行研究。近三四年來,出於科研需要,從國外引進了裸鼠。在1978 ~ 1980期間,中國醫學科學院所屬單位先後從法國、英國、美國獲得裸鼠。1980北京衛生部藥品生物制品檢定所從日本引進裸鼠進行繁殖。經過16個月的飼養,繁殖正常,現已提供科研使用。
目前nu/nu雌鼠不用於繁殖裸鼠。由於其繁殖性能低下,壹般采用雜合子交配或隱性純合子雄性與雜合子雌性小鼠交配。這種交配方式的後代會有正常表型和裸鼠的後代,比例為1: 1。Nu基因壹般在繁殖期導入C57BL/10小鼠。將基因導入同源品系時,雌性C57BL/10壹般與雄性C57BL/10-nu(遠交品系)雜交。交配方法及結果如下:北京市藥品檢驗所用於繁殖裸鼠的鼠種為BALB/C-nu/nu,於1973從丹麥引進日本中央實驗動物研究所。經過三年的不斷培育,它被移交給日本CLEA株式會社進行生產。1980是CLEA介紹的。雄性小鼠是沒有胸腺的裸鼠(BALB/C-nu/nu),雌性小鼠是有胸腺的雜交小鼠(BALB/C-nu/+)。BALB/C-nu/+♀和BALB/C-nu/nu♂的隨機交配方法取得了較好的效果,裸鼠生產性能良好:受胎率81.5%,平均產仔率8.1,平均產仔率3.99。
進料條件
因為裸鼠缺乏T細胞,容易受到細菌、病毒和黴菌的感染。如果用常規的動物方式飼養,只有少數裸鼠能存活壹個月以上,最多不超過四個月,而在隔離器中飼養的則能存活壹年以上。因此,裸鼠的壽命與飼料的衛生條件密切相關。通常,它首先在隔離器中傳播。然後在沒有特定病原體屏障的環境中放入飼料中。應在動物和外界之間安裝壹道屏障,用於無病原體條件下的飼料。屏障越嚴,健康的裸鼠就越有保障。但如果屏障類型選擇不當,其效果將無法保證,因此應不斷檢查其是否符合條件。1.無致病條件下飼養裸鼠設備⑴塑料籠,帶密封空氣過濾器。每個籠子本身就是壹個單元。它包括壹個標準的透明塑料籠,籠蓋上覆蓋有空氣過濾材料。靠近籠子,後者用膠帶纏繞數周將其密封。然後,可以將籠子放在壹般實驗室的標準籠架上。過濾材料是片狀的,由稀疏的(但無紡的)聚酯纖維制成。它應該能夠防止微生物從外面進入籠子。所有的籠子都用高壓蒸汽消毒。使用時和飼養管理(如添加飲用水和飼料、清理籠子、斷奶等。),必須在保護罩內進行。該罩包含正壓過濾空氣。也可以是層流(無湍流)和單向的。上述操作模式是最簡單的非致病動物飼養方法。(2)動物隔離器。最常用的裝置由柔軟的片狀透明聚乙烯基塑料制成,但也可以由有機玻璃、不銹鋼、鋁皮和尼龍制成。市面上的成品都有壹定的規格,尺寸也可以根據需要專門設計。這是壹個無菌的客廳,可以排除任何微生物。室內空氣被過濾進出該裝置。所有的食物和供應品都經過消毒,然後通過無菌入口室送入容器,這樣可以消除任何微生物。首先,選擇化學滅菌劑和高壓蒸汽對設備進行滅菌。在無菌環境下,相同遺傳背景的裸鼠壽命與正常雜合子小鼠相似。然而,Poiley等人(1974)發現新生小鼠在這種環境下的存活率低於壹般環境。為了使其胃腸功能更接近正常,有人建議無菌環境下的裸鼠接種壹次非致病菌(Poliey et al .,1974;伊頓等,1975)。通過這種方式,它往往可以提高繁殖性能,並有助於將無菌小鼠從隔離器轉移到條件較差的儲存設備中。為了最有效地控制環境,從而盡力保存無菌(或帶有壹定菌群)的裸鼠,隔離器是理想的保存設備。但它也有缺點,就是費工,而且在壹定空間內飼養動物的數量有限。(3)空氣層流裝置。它包括壹個標準電池、壹個蓋子和壹個柵極。每套電器形成壹個獨立的環境,與室內通風系統無關。它自行輸入過濾後的空氣,將超凈空氣完全註入鼠籠,並成列排出。因為每套用具都是不相關的,有正壓空氣保護,所以可以放在正常情況下。它們是便攜式的,便於維護,可以最大限度地利用場地和設備。這種方法的成功取決於管理的質量。嚴密監控中庭的汙染和人流情況,只允許專職人員進入室內。鼠籠要維持在正壓、單向氣流的條件下,所有接觸到老鼠的物品(飼料等物品)都要消毒。飲用水必須經過處理以去除細菌。全職工人必須佩戴無菌外科口罩、帽子、手套和長袍。接觸動物時,必須使用頭上帶橡皮的鑷子,並且必須浸泡在變性乙醇中(放在壹邊)。(4)空氣層流室。與上述放置在房間內的小型空氣層流裝置不同,整個房間的環境都被正壓過濾空氣所籠罩。設計時,需要在進氣口安裝進氣開關和指示燈。室內工作人員的服裝如上。室內使用的飼料、墊料、籠舍的消毒,必須用兩端帶開關的高壓蒸汽滅菌器進行。引入法可以最大限度的利用房屋飼養動物。雖然安裝這種房間費用昂貴,但層流室和對人員出入的嚴格限制可以保證生長期裸鼠的順利生產,是大量繁殖裸鼠的最佳途徑。例如,由於它的采用,近五年來(1973 ~ 1977),弗雷德裏克癌癥研究中心每年生產2萬多只裸鼠。2.環境控制(1)溫度。裸鼠適宜的室溫為26 ~ 28℃(78 ~ 820°F)。裸鼠無毛,比毛鼠失去體溫更快。在連續的空氣層流中,它們的散熱更快,需要28℃(800F)左右的室溫來補償。壹般飼料室內溫度可控制在25℃±65438±0℃。如果裸鼠和毛雜合子鼠同籠飼養,室溫可以略低。在連續空氣層流室中餵食的裸鼠需要將室內溫度提高到28℃。(2)濕度。相對溫度應保持在40 ~ 60%,此時成年裸鼠皮膚水分流失最少。濕度低不利於新生裸鼠的存活,在層流空氣環境中尤為重要。(3)通風。壹般認為每小時65,438+00 ~ 65,438+05次需要通風換氣,使用高效過濾器(99.9%)才能保證良好的空氣過濾,去除空氣中大於0.3μm的顆粒物。出風口還有過濾裝置(也可以低效率使用)防止空氣倒灌時的汙染,如何從外面維護這些過濾器要先設計好。在空氣層流室內,空氣的正壓至少為0.65cmH2O。空氣的流向和速度應控制均勻和自由。過濾後的空氣不斷通過籠子,在動物環境中流動,理論上是防止外源汙染的屏障。(4)光線。每日應保持10小時的光照,14小時的光暗循環。不使用窗戶,使用人工照明,使光線全年恒定,但避免過多的熒光燈。3.培養裸鼠的籠子和帶墊料的籠子,籠底面積應為97平方厘米(15平方英寸),高度為12.7厘米(5英寸),應由能承受高壓蒸汽滅菌的塑料或不銹鋼制成。其形狀應易於重疊,以便滅菌和儲存。透明塑料籠更好,不用打開籠蓋就能觀察到動物。籠子底部要墊東西,不能放網。籠子必須每周清洗壹次或進行必要的處理,以確保環境清潔幹燥。用洗滌劑或其他清潔劑清洗過的籠子或其他物品必須徹底清洗。否則會刺激裸鼠皮膚。墊料與裸鼠皮膚直接接觸,不能有刺激性。妳可以選擇沒有灰塵和鋒利碎片的硬木屑,磨碎的玉米稭稈,或松木刨花。使用前壹定要消毒,消毒後不形成塊狀才可以使用。可以用棉花或者棉紙給裸鼠造個窩。但如果墊料壹寸厚,室溫控制得當,能使裸鼠感染舒適,壹般不需要棉花或棉紙。4.飼養與供水(1)飼養。裸鼠的營養需求與其他品系小鼠相似。因此,可以使用任何市售的飼料。食物必須消毒。可將食物攤成單層,放入小碟或穿孔袋中進行高壓蒸汽滅菌(45分鐘,120℃)。滅菌前,應增加不耐熱營養素的量(Williams等人,1968)。此外,可以補充全麥面包和克隆牛奶,以提高生育能力,防止同類相殘(Poiley等人,1974)。(2)喝水。有時,自來水中含有少量各種非致病細菌(包括假單細胞銹菌)。為避免通過水源汙染裸鼠種群,建議飲用水過氯化至12 ~ 15 ppm;或用鹽酸酸化飲用水,使其pH值達到2.5 ~ 2.8,可有效控制其汙染率,尤其是偽單細胞菌的汙染。如果因高壓滅菌而損失過多的維生素,可在飲用水中加入多種維生素(如每1000ml加入1ml各種維生素),混合液通過直徑為0.2μm的微孔濾膜過濾滅菌,每平方英寸壓力不得超過10 lbs。維生素混合物和水應適當檢查某些細菌培養,水瓶應每隔壹天更換壹次。在兩次使用之間,水瓶和飲水管必須清洗和消毒。胃腸道的細菌可以通過飲水補充抗生素來消滅(範德華基,1966)。而且也是在嚴格的環境控制下,防止裸鼠可能出現的外源性汙染的附加措施。我們使用的四個公式如表4-4所示。以下抗生素很少被消化道吸收,每種配方應每周更換壹次,每四周輪換壹次,以減少耐藥菌株的出現。如果壹開始就在嚴格控制的環境下繁殖無菌裸鼠,就不需要使用抗生素,因為添加抗生素後繁殖技術出錯的可能性增加。5.空氣層流室的維護層流室從地面到天花板、設備都要保持清潔無破損。每月必須進行室內無菌檢測,每平方米放置壹個平皿,檢查室內空氣中的細菌數量。各國對落菌的檢查各不相同,如下表4-5所示。各國層流室落菌限度的規定規定了平板甲培養基的暴露時間(分鐘),日本普通瓊脂5’37℃48小時的培養時間和溫度落菌限度